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高效液相色譜柱以乙烯醇共聚物為基質(zhì)的色譜柱，即使其載炭量很高也能保持表面的濕潤(rùn)。多孔結(jié)構(gòu)具有足夠大的平均孔徑，對(duì)小分子化合物、多肽和小分子蛋白能夠產(chǎn)生理想的分離效果。在有機(jī)溶劑比例較高的流動(dòng)相中，該柱具有與硅膠基質(zhì)色譜柱相同的柱效，但在堿性緩沖溶液為流動(dòng)相條件下，其分離效率則超過(guò)硅膠色譜柱。顯著的特點(diǎn)之一是基質(zhì)被烷基化的填料的洗脫順序，其保留能力與碳鏈長(zhǎng)度成正比。高效液相色譜柱堵塞要怎么辦?如果是遇到堵塞的情況，先要確定堵塞是由于什么原因引起的，如果是由于色譜柱中殘留的緩沖鹽...

今天小編給大家講講高效液相色譜柱峰形拖尾的9個(gè)原因：1.色譜柱物理?yè)p壞色譜柱有物理?yè)p壞是造成峰形拖尾的根源，解決方法就是更換新柱。2.色譜柱內(nèi)填料污染流動(dòng)相和樣品中的雜質(zhì)是色譜柱主要污染源。流動(dòng)相所用的各種溶劑至少是分析純，盡量使用色譜純?cè)噭Ａ鲃?dòng)相所用的水要是超純水或全玻璃器皿雙蒸水。用前先用0.45um溶劑微孔過(guò)濾(器)過(guò)濾，除去可能存在的微粒。流動(dòng)相建議現(xiàn)用現(xiàn)配，對(duì)于含鹽的溶液尤其注意長(zhǎng)置會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌或出現(xiàn)沉淀。此外還得保證儲(chǔ)存流動(dòng)相的容器清潔。復(fù)雜樣品可選用0.45um...

高效液相色譜柱是由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管的材質(zhì)有很多，比如聚合物、玻璃、不銹鋼等。但是建議柱管用不銹鋼材質(zhì)，因?yàn)椴讳P鋼這種金屬耐高壓、耐腐蝕且硬度高，相比于玻璃等材質(zhì)不易摔壞。不過(guò)當(dāng)壓力不高于70Kg/cm2時(shí)，也可采用厚壁玻璃或石英管。對(duì)于色譜柱柱管內(nèi)壁要求有很高的光潔度，不銹鋼柱內(nèi)壁會(huì)經(jīng)過(guò)多次拋光，這是為提高柱效，減小管壁效應(yīng)。0.1μm高光潔度色譜柱柱管能夠快速分析的同時(shí)保持超高的柱效;使用壽命長(zhǎng)，不僅能夠減少頻繁更換色譜柱帶來(lái)...

高效液相色譜柱是色譜分離的核心。一支合適，穩(wěn)定，高效的色譜柱對(duì)建立普適性強(qiáng)，重現(xiàn)性好的方法是不可少的。因色譜柱是消耗品，隨著使用時(shí)間或進(jìn)樣次數(shù)的增加，會(huì)出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一般來(lái)說(shuō)是柱效的下降。此時(shí)需要對(duì)色譜柱進(jìn)行再生：(1)反相柱的再生，采用以甲醇:水=90:10(V/V),純甲醇，異丙醇，二氯甲烷等溶劑作流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱的量為20~30倍色譜柱體積然后再以相反順序沖洗色譜柱。(2)正相柱再生。順次以正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲...

高效液相色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學(xué)性質(zhì)包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇高效液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱。2.如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng);可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑...

高效液相色譜柱的鍵合基質(zhì)分為硅膠基質(zhì)、聚合物基質(zhì)等，其中硅膠基質(zhì)應(yīng)用較為廣泛，其特點(diǎn)主要包括以下3方面：(1)低pH值，硅膠鍵合鍵容易水解(pH8)。(2)在接近中性的條件時(shí)，硅醇基裸露，顯酸性，不適宜分離堿性化合物。(3)某些硅膠被一定金屬污染，這些金屬會(huì)引起峰的不對(duì)稱或拖尾，甚至化合物的死吸附。高效液相色譜柱的硅膠基質(zhì)可分為全多孔硅膠微粒、雜化硅膠顆粒和實(shí)心核硅膠顆粒。1、全多孔硅膠基質(zhì)：全多孔硅膠，以其全多孔的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有很高的比表面積，故具有很高的柱效。其機(jī)械強(qiáng)度大的...

反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*泛的技術(shù)，主要是因?yàn)樗m用于分析絕大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡(jiǎn)單的清洗步驟來(lái)除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能。經(jīng)過(guò)等度運(yùn)行后的高效液相色譜柱，有時(shí)用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強(qiáng)的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個(gè)柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...